細(xì)菌新型生化鑒定管使用說(shuō)明
―― 070040 大腸埃希氏菌O157:H7生化鑒定盒(12種×10次)管
一)大腸埃希氏菌O157:H7生化鑒定盒 整套試劑及用品
鑒定生化反應(yīng)的12種試劑及配套試劑5種(表1)、0.85%無(wú)菌生理鹽水10瓶、0.5 McFarland的濁度管1瓶、一次性吸管10支。
二)生化管的使用方法
開(kāi)啟西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在無(wú)菌條件下,按鋁蓋上的箭頭方向打開(kāi)鋁蓋,撕開(kāi)鋁蓋,打開(kāi)西林瓶膠塞(如圖1)。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
三)大腸埃希氏菌O157:H7生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法
將疑是大腸埃希氏菌O157:H7的新鮮菌苔置于已配備的無(wú)菌生理鹽水中,與0.5 McFarland的濁度管比濁,將菌懸液制備成0.5McFarland ( 約108cfu/mL ), 37℃培養(yǎng)18-24h,用吸管吸取2滴(約0.06mL)菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞,一般采用全加塞(如圖2左兩瓶所示),特殊情況在下表注明采用半加塞(如圖2右兩瓶所示),直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)(如圖2),或放置于合適的瓶架中,于35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),結(jié)果觀察見(jiàn)表1。注意:如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間或培養(yǎng)方式,請(qǐng)?jiān)斠?jiàn)每種生化鑒定管附帶的使用說(shuō)明。
表1 | |||||
產(chǎn)品名稱(chēng) | 結(jié)果判定 | 培養(yǎng)時(shí)間(小時(shí)) | 使用說(shuō)明 | ||
陽(yáng)性 | 陰性 | ||||
山梨醇 | 黃色 | 紫色 | 18-24 | ||
纖維二糖 | |||||
棉子糖 | |||||
蛋白胨水 | 紅色 | 不變色 | 24 | 培養(yǎng)后加靛基質(zhì)試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果。 | |
西蒙氏檸檬酸鹽 | 藍(lán)色 | 不變色 | 24-48 | 西林瓶半加塞(如圖2右兩瓶所示)用接種針挑取新鮮菌苔在斜面上劃“之”字形接種,豎立培育。 | |
鳥(niǎo)、賴氨酸脫羧酶 | 試驗(yàn)管藍(lán)綠色,對(duì)照管變 | 試驗(yàn)管與對(duì)照管均變黃 | 18-24 | 每株被檢菌應(yīng)同時(shí)接種氨基酸對(duì)照管一支,并加滅菌液體石蠟5-8滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18-24小時(shí),未見(jiàn)陽(yáng)性結(jié)果,繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí),再做最終結(jié)果判定。 | |
半固體瓊脂 | 擴(kuò)散生長(zhǎng) | 無(wú)擴(kuò)散生長(zhǎng) | 24-48 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種,豎立培育。 | |
三糖鐵瓊脂 | 產(chǎn)氣 | 有氣泡 | 無(wú)氣泡 | 24 | 西林瓶半加塞(如圖2右兩瓶所示)用接種針挑取新鮮菌苔穿刺,穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種,豎立培育。 |
分解蔗糖、(或)乳糖 | 斜面和底層變黃色 | 不變色 | |||
分解葡萄糖 | 底層變黃,斜面不變色或者紅色加深 | 不變色 | |||
產(chǎn)H2S | 變黑色 | 不變色 | |||
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR | 紅色 | 不變色 | 24-48 | 培養(yǎng)后加MR試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果。 |
VP | 紅色 | 不變色 | 48 | 培養(yǎng)后依次加入10滴VP試劑甲液及4滴乙液,混勻,再培養(yǎng)10-20分鐘觀察結(jié)果。 | |
備注:本鑒定盒是按照環(huán)凱產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。 |
四)大腸埃希氏菌O157:H7的生化鑒定程序(見(jiàn)下圖)和生化鑒定特征(見(jiàn)表2)
凡符合上述大腸埃希氏菌O157:H7生化反應(yīng)的純菌落,經(jīng)用抗E.coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或EHEC O157:H7乳膠凝集試劑測(cè)試呈陽(yáng)性結(jié)果,即可報(bào)告為該食品試樣中檢出大腸埃希氏菌O157:H7。