產(chǎn)品名稱：志賀氏菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for Shigella
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 規(guī)格 |
| KJD06L | 24 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介：本試劑盒基于環(huán)介導(dǎo)的恒溫擴(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于食品中志賀氏菌的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。
檢測原理：利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng)，實現(xiàn)在恒溫條件下（60-65℃）進(jìn)行連續(xù)快速擴(kuò)增。反應(yīng)加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。
產(chǎn)品特點：
1. 快速簡便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應(yīng)可在1 h內(nèi)完成；
2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設(shè)計多條引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性；
3. 靈敏度高：最低檢驗限達(dá)到6 CFU/Test；
4. 判讀簡單：反應(yīng)前加入顯色指示劑，反應(yīng)后通過肉眼觀察反應(yīng)液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應(yīng)后開蓋造成的氣溶膠污染。
志賀氏菌核酸快速檢測試劑盒產(chǎn)品組分：
| 組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格數(shù)量 |
| DRL06 | 檢測試劑（凍干） | 3排 × 8管 |
| FRL01 | 復(fù)溶液 | 650μL × 1管 |
| PRL06 | 陽性對照（凍干） | 1管 |
| SHR01 | 陰性對照（凍干） | 1管 |
| SHR02 | 裂解液 | 1mL × 1管 |
| SHR03 | 顯色指示劑 | 80μL× 1管 |
| SHR04 | 超純水 | 1mL× 1管 |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲存，有效期為12個月。
適用儀器：
1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。
樣品富集：
1. 樣品前處理：取25 g待檢樣品置于225 mL志賀氏菌增菌肉湯中，前增菌10-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。
2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應(yīng)該超過24 h；利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
志賀氏菌核酸快速檢測試劑盒使用指南：
1，樣品前處理
A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清，50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次，6000 r/min離心5 min，完全去除上清；
b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
B. 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。
2，陰、陽性對照和干粉試劑復(fù)溶
A. 陰、陽性對照復(fù)溶：首次使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
B. 干粉試劑復(fù)溶：取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照），每管加入20 μL復(fù)溶液，完全溶解后待用。
3，擴(kuò)增反應(yīng)
A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設(shè)置到64℃待用；
B. 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中各加入顯色指示劑2.5 μL；
C. 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子；
D. 將所有的反應(yīng)管置于恒溫儀器中，恒溫64℃反應(yīng)50 min。
4，結(jié)果判讀：反應(yīng)結(jié)束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應(yīng)管以此作為對照進(jìn)行判讀，若陰陽對照反應(yīng)管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
LAMP檢測操作指南
LAMP使用方法
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