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食品微生物檢驗(yàn)GB4789.4-2016 沙門氏菌檢驗(yàn)及注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間：2020-09-21 瀏覽次數(shù)：26583 分享：

一、沙門氏菌生物學(xué)特性

生物學(xué)特性：沙門氏菌屬是食源性細(xì)菌性腸胃炎的首要病原菌，屬于腸桿菌科，革蘭氏陰性無芽孢桿菌，營養(yǎng)需求不高，需氧或兼性厭氧。典型菌株多具有周生鞭毛、能運(yùn)動(dòng)（除雞瘟沙門菌和雞沙門菌外）、大部分菌株產(chǎn)H2S、能分解葡萄糖并產(chǎn)氣，最適培養(yǎng)溫度為37℃，最適pH 7.2～7.6。耐受膽鹽，在糞便、土壤、食品、水中可生存5個(gè)月至二年之久。

血清型：沙門菌屬由兩個(gè)種組成：腸道沙門菌（S.enterica）和邦哥沙門氏菌（S.bongori）。目前已知沙門氏菌血清型有2500多種。

流行學(xué)特征：引起食物中毒最常見的沙門氏菌包括鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌。而易引起沙門氏菌中毒的食品則有肉、蛋、乳類等。

二、沙門氏菌的檢驗(yàn)

三、培養(yǎng)基原理解析

1、緩沖蛋白胨水（BPW）

● 其成分中含有磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，起緩沖液的作用；
● 蛋白胨提供生長營養(yǎng)，有利于損傷沙門氏菌的復(fù)蘇。

2、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）

● 配方中硫代硫酸鈉和碘經(jīng)氧化生成四硫磺酸鈉，它對大腸菌群有抑制作用，對沙門氏菌無影響（因沙門氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸鈉，而大腸菌群沒有這種酶，故生長受抑制）；
● 碳酸鈣為緩沖劑，可使沙門氏菌不致因酸堿度改變面死亡。
● 由于配方含碳酸鈣，因此，該培養(yǎng)基配置后的最終pH不在7.0±0.2，而是偏堿性。

四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）

3、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）

● 蛋白胨提供碳源和氮源滿足細(xì)菌生長的需求；乳糖是可發(fā)酵的糖類；亞硒酸氫鈉抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；磷酸鹽是緩沖劑；L-胱氨酸為還原劑。
● 使用過程中要注意SC培養(yǎng)基不穩(wěn)定，配置時(shí)避免過度加熱。

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）

4、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基（BS）

● 配方中亞硫酸鈉可與檸檬酸鉍銨生成亞硫酸鉍，抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群；硫酸亞鐵可產(chǎn)生硫化氫，并與鐵反應(yīng)生成黑色沉淀。
● 沙門氏菌在BS上的典型菌落特征：具有金屬光澤的棕色或黑色菌落。但有些菌株形成非典型菌落特征：灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。
● BS平板應(yīng)制備后避光常溫保存，并在24h內(nèi)使用。

亞硫酸鉍瓊脂（BS）菌落特征

5、HE瓊脂培養(yǎng)基

● 配方中膽鹽、去氧膽酸鈉、溴麝香草酚蘭等成分可抑制革蘭氏陽性菌生長；酸性復(fù)紅作為酸堿指示劑的同時(shí)，也可抑制陽性菌，但對陰性腸道菌無抑制作用，選擇性較弱。硫代硫酸鈉可被細(xì)菌還原產(chǎn)生硫化氫，與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成黑色硫化亞鐵。
● 菌落特征：藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或全幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。

HE瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028

6、XLD瓊脂培養(yǎng)基

● 配方中木糖、乳糖和蔗糖成分作為可發(fā)酵的碳源，除志賀氏菌外，其他大多數(shù)腸桿菌均能發(fā)酵木糖；沙門氏菌發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，形成酸性環(huán)境有利于產(chǎn)生脫羧酶使賴氨酸脫羧，從而使培養(yǎng)基的pH值升高向堿性轉(zhuǎn)變；在堿性條件下，硫代硫酸鈉及檸檬酸鐵銨成分與沙門氏菌產(chǎn)生的硫化氫反應(yīng)是的菌落的顏色呈黑色；去氧膽酸鹽成分可抑制革蘭氏陽性菌的生長。
● 菌落特征：菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心。

XLD瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028

7、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基

● 蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;膽鹽抑制革蘭氏陽性菌;選擇性添加劑增強(qiáng)培養(yǎng)基的抑制雜菌的能力;混合色素分別與沙門氏菌和大腸菌群所對應(yīng)的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在淡黃色平板上沙門氏菌產(chǎn)生品紅色的菌落，大腸菌群產(chǎn)生藍(lán)綠色的菌落。

CRM004 沙門顯色培養(yǎng)基——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028

8、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基

● 蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時(shí)通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

三鐵塘

9、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基

● 具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺）和二氧化碳，使培養(yǎng)基變堿，使指示劑顯示出來。
● 結(jié)果判讀：陽性為試驗(yàn)管為綠色-藍(lán)綠色，對照管變黃色；陰性為試驗(yàn)管和對照管均變黃色，或均不變色。

賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)陽性

10、靛基質(zhì)試驗(yàn)

● 某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。
● 結(jié)果判讀：陽性為滴加靛基質(zhì)試劑后液面立即變玫紅色；陰性為滴加試劑后不變紅色。

靛基質(zhì)試驗(yàn)

11、尿素酶試驗(yàn)

● 具有尿素酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)呈堿性，酚紅指示劑在pH6.8時(shí)呈黃色，pH8.1呈粉紅色。
● 結(jié)果判讀：陽性為玫紅色；陰性為淡橙紅色-淡黃色。

尿素酶試驗(yàn)

12、氰化鉀利用試驗(yàn)

● 氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細(xì)菌的生長,但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍能生長,以此鑒別細(xì)菌.。
● 結(jié)果判讀：陽性為試驗(yàn)管和對照管都有生長變渾濁；陰性為試驗(yàn)管澄清不見生長，對照管生長渾濁。

氰化鉀利用陰性結(jié)果

13、糖（醇）發(fā)酵試驗(yàn)

● 絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖（醇）類作為碳源和能源，但是它們在分解糖（醇）的能力上有很大的差異，有些細(xì)菌能分解某種糖（醇）并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來斷定。
● （指示劑為溴甲酚紫）結(jié)果判讀：陽性為變黃色；陰性為紫色。

甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)

生化試驗(yàn)結(jié)果判讀

14、沙門氏菌屬不同生化反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)百分率

15、沙門氏菌判定表

● 在接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí),可直接接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基，一定要注意是同一個(gè)菌落，這種實(shí)驗(yàn)組合的優(yōu)勢是可篩選掉更多的非沙門氏菌，減少后續(xù)工作量。
● 上述結(jié)果判定僅適用于典型沙門氏菌，如出現(xiàn)非典型結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行系統(tǒng)生化鑒定和血清學(xué)分型進(jìn)行確認(rèn)。

16、071740 沙門氏菌生化鑒定盒（接種鼠傷寒沙門氏菌的結(jié)果）

17、EasyID 沙門氏菌生化鑒定盒（接種鼠傷寒沙門氏菌的結(jié)果）

四、血清試驗(yàn)

血清學(xué)鑒定中的多價(jià)菌體（Ｏ）和多價(jià)鞭毛抗原鑒定是沙門氏菌鑒定的必做項(xiàng)目，血清學(xué)分型為選作試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室必須配備沙門氏菌的多價(jià)菌體（Ｏ）和多價(jià)鞭毛（Ｈ）診斷血清。血清學(xué)試驗(yàn)必須基于生化結(jié)果試驗(yàn)的結(jié)果，不能單純以血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來報(bào)告最終。

血清試驗(yàn)