文章來源：制藥人職場加油站 公眾號

得到在無菌生產過程中是否會發(fā)生容器、未分裝產品及灌裝產品、未分裝產品及灌裝產品被微生物侵入的直觀信息，這一工藝是否具備可靠地生產無菌產品的基本能力，是非常有價值的，因此，無菌生產中培養(yǎng)基灌裝 (工藝模擬試驗)是：
      ◆工藝驗證中關于產品無菌保證的最重要的部分；
      ◆是對于無菌生產工藝的檢查中必須要考慮的點；

這一點，在眾多的相關法規(guī)中，也有所體現：
      ◆EU Guidelines to Good Manufacturing Practice,Annex I 約半頁紙長的文字說明了原則要求
      ◆FDA Guidance for Industry: Sterile DrugProducts Produced by Aseptic Processing (2004): 詳細的要求,7 頁。
      ◆ISO 13408-1 Aseptic processing of healthcare products, 1998 (draft of revised version from 2006 available) 詳細要求, 5 頁。
      ◆USP <1116>Microbiological Evaluation ofClean Rooms and other Controlled Environments 短的部分說明了原則要求 ，參照 FDA Aseptic Guide，(Ph.Eur. 5.1.1 中只有一句話)。
      ◆PIC Recommendation on the Validation ofAseptic Processes(詳細要求, 7頁, 對不同劑型有專門的說明，但其接受標準不再有效，但其接受標準不再有效)
      ◆Guide to Inspections of sterile Drugsubstance Manufacturer, FDA 1994 最佳操作規(guī)范:
      ◆PDA Technical Report No. 28, ProcessSimulation Testing for Sterile Bulk Pharmaceutical Chemicals, RevisedSupplement 2006 (非常詳細的建議, 對于BPCs有專門的解決方案)。
      ◆PDA Technical Report No.22 1996,Process Simulation Testing for Aseptically Filled Products ( 非常詳細, 重原理不重具體要求）。

如何確保無菌制造產品的無菌性？通過什么來證實這個過程的有效性？又如何做好培養(yǎng)基的灌裝，確保它給出了不切實際的錯誤訊息？

我們都知道，無菌制造產品的無菌保證是基于以下各點的聯(lián)合作用：
      A.設施及制造工藝的設計
      B.適當的設備 / 設備的滅菌
      C.生產過程控制
      E.驗證
      F.原料的生物負荷
      G.人員培訓及實際操作
      H.測量系統(tǒng)，包括環(huán)境及人員的監(jiān)控

這些要素能夠有效地共同運作的能力, 是通過工藝模擬試驗即培養(yǎng)基灌裝來證實的，但是: 這些研究的價值在于，它只是實際生產過程的真實表現，因此工藝模擬必須盡量與實際生產過程參數一樣。另外：培養(yǎng)基灌裝甚至比最差情況挑戰(zhàn)還要嚴格，因為幾乎在所有情況下，微生物在培養(yǎng)基中的增殖要比在實際產品中更容易。

總體上來說，要做好培養(yǎng)基的灌裝研究，需要關注以下16要點：

1.培養(yǎng)基灌裝研究所包含的操作:
      A.模擬必須包括產品成為無菌狀態(tài)后的所有應用的無菌生產工藝步驟 (如轉運, 灌裝, 裝載/卸載, 凍干, 加塞, 軋蓋)
      B.模擬必須包括所有的無菌處理 (如灌裝線的設置, 無菌連接, 人員的介入操作)
      C.培養(yǎng)基灌裝研究不包括非無菌混合操作或產品的除菌工藝 (如無菌過濾)
      D.培養(yǎng)基的制備和滅菌可以與產品的制備/除菌工藝采用不同的方式

2：實驗的頻率和數量 (每條灌裝線的最小數量）:
      A.對于新的產品/設備/設施的首次驗證：三個連續(xù)的循環(huán)；常規(guī)的每半年的再驗證：一個培養(yǎng)基灌裝循環(huán)，以證明狀態(tài)是受控的!
      B.再驗證(對初始驗證的重復)的原因: 在沒有確切原因的情況下超出行動限度, 無菌工藝及/或設備的重大變化, 最終產品的無菌試驗顯示產品污染，長時間的停產。

3.產品/容器匹配的矩陣解決方案一條灌裝線生產多個產品時，根據下列因素可被劃分為不同的表型組：
      A.灌裝工藝
      B.不同的容器密封方式
      C.由此選出兩個或更多個在下列方面能涵蓋所有其它相關產品的產品：
      D.容器的大小、開放或密封的設計
      E.灌裝線的速度和介入
      F.涉及的操作人員數量
      G.凍干, 貯存容器的形式
這些“矩陣產品” 都要包含在首次驗證和再驗證中。

4.培養(yǎng)基灌裝實驗采用的批量:
H.對于大多數傳統(tǒng)的灌裝工藝，5.000 到 10.000 單位就足夠了
I.對于高速灌裝線可能需要更多的單位
J.對于生產批量小于 5.000 的產品，培養(yǎng)基灌裝的單位數應該至少等于日常生產的最大批量 

5.培養(yǎng)基灌裝過程中的注意事項:模擬灌裝必須充分，要包括一定數量的典型介入和非典型的介入行為，數量要有代表性
      A.必須包括停機和最大放置時間
      B.必須包括更衣和倒班——如果這是正常生產的一部分

6.培養(yǎng)基的選擇：
      A.適宜促進寬范圍的微生物生長，如大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基（胰蛋白酶 大豆肉湯，TSB）
      B.干粉工藝：具備與干粉產品流動性能相似的無菌TSB干粉或無菌安慰劑粉末（乳糖,甘露醇…)
      C.培養(yǎng)基應該支持需氧菌生長，也支持厭氧菌的生長（皮膚生長的菌）
      D.對于會形成嚴格厭氧環(huán)境的工藝：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 (FTM)能夠支持真正的厭氧菌的生長（如果在環(huán)境監(jiān)測樣品或無菌試驗中檢出厭氧菌這樣做也是必需的） 

7.培養(yǎng)基的促生長試驗：
      A.必須用藥典要求的標準微生物及工廠特定微生物（分離自環(huán)境監(jiān)測及無菌試驗）來進行
      B.至少在培養(yǎng)期結束時應該進行。
      C.挑戰(zhàn)水平必須 < 100 CFU/單位。

8.灌裝體積:選擇的體積要使培養(yǎng)基能適當地接觸容器內表面，并且當翻轉或旋轉時能接觸到封口處的內表面。
      A.25%至40%的頂空能確保獲得足夠的氧。
      B.對于厭氧灌裝: 用惰性氣體代替氧氣，并使之完全充滿容器。

9.灌裝單位的培養(yǎng)：
      A.通常: 所有在工藝模擬中生產的培養(yǎng)基必須進行培養(yǎng)。
      B.被排除在外未進行培養(yǎng)的單位，必須清楚地說明排除的合理性。
      C.對于因容器破損而丟棄的單位，要求同日常生產一樣。
      D.完整的單位必須被培養(yǎng)，包括那些存在外觀缺陷的單位。

10.培養(yǎng)條件:
      A.足夠的培養(yǎng)時間，以確保那些脆弱的或受損的微生物也能得到恢復并增殖（不少于14天）。
      B.培養(yǎng)期間溫度不超出 20-35℃的范圍
      C.如果用兩個溫度培養(yǎng)，從較低的溫度開始，中間要觀察結果

11.凍干法的模擬：
      A.嚴格地用培養(yǎng)基模擬凍干工藝顯然有難度（如循環(huán)可能持續(xù)幾天）
      B.應該首先識別有污染風險的活動，并加以模擬（如未完全密封小瓶的轉運，凍干機的裝載……)
      C.凍干循環(huán)的模擬，應該采用一次或多次的部分真空
      D.小瓶必須不被冷凍
      E.注意確保培養(yǎng)基的需氧狀態(tài)。

12.與人員相關的考慮：
      A.在進行培養(yǎng)基灌裝時要出現最大的人員數量。
      B.所有受權進入無菌操作間的人員（包括技術人員和維護人員）必須至少每年參加一次培養(yǎng)基灌裝。
      C.進行有代表性數目、類型及復雜性的正常日常介入。
      D.還要模擬非常規(guī)或非典型性介入/事件（維護，停機，設備調整）。
      E.必須考慮操作人員的疲勞狀態(tài)（如夜班）。
      F.管理人員要評估每個操作人員對于書面操作程序的符合性（如錄像資料）。

13.單位的檢查：
      A.目檢是否有生長
      B.單位的處理，要確保能檢出在容器處或封口表面處的污染
      C.要由經過培訓，并且有資格能夠發(fā)現微生物生長跡象的人員進行
      D.在兩個溫度下培養(yǎng)時必須進行中間判讀
      E.可疑單位立即交給質量控制的微生物人員

14.環(huán)境監(jiān)測：
      A.進行總的懸浮粒子數及微生物的監(jiān)測
      B.監(jiān)測必須覆蓋所有的無菌工藝步驟，包括設置過程及設置人員
      C.取樣點，測試頻率及樣品數量應該與常規(guī)生產相同或更多以證實日常環(huán)境狀況

15.所有劑型及所有無菌工藝的研究方案的總的要求
      A.工藝模擬試驗應該盡可能接近地模仿日常生產過程 ( 包括最差情況)
      B.公司內對于培養(yǎng)基灌裝中所要模擬的條件和活動的基本原則應有詳細的說明
      C.培養(yǎng)基灌裝不能用作出現不必要的污染風險行為的理由。

16.接受標準與試驗結果的判斷：目標是零污染，任何污染都是客觀事實，應進行調查.警報/行動水平如下:
      A.當灌裝少于 5000 單位時,不得檢出污染單位，如果存在一個污染單位（行動水平），則需要啟動調查，并進行再驗證。
      B.當灌裝數量為5.000至10.000或更多單位時: 一個單位被污染 (警報水平)則需要啟動調查,并考慮是否需要重復培養(yǎng)，如果存在兩個單位被污染 (行動水平),需要啟動調查，并進行再驗證，污染單位必須與培養(yǎng)基灌裝期間采取的模擬行為和其發(fā)生時間是相關聯(lián)的。
      C.必須有一個詳細的書面程序，規(guī)定出現培養(yǎng)基灌裝超出警報/行動水平時的處理程序，這里存在著大量的調查工作及文件記錄。