細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁，究竟是什么？
發(fā)布時(shí)間：2022-06-20 瀏覽次數(shù)：2325
養(yǎng)娃要悉心照料，同樣養(yǎng)細(xì)胞也需要無(wú)微不至的關(guān)懷，各種吃的穿的用的，更是一樣都不能少，為了這些“可愛(ài)”的細(xì)胞們，不知道有多少生物醫(yī)學(xué)科研人操碎了心。
這不，最近養(yǎng)的好好的細(xì)胞，這狀態(tài)說(shuō)差就差了，還不是細(xì)胞污染的原因，這究竟是什么情況？
細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁，究竟是什么？
如果排除了污染，細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細(xì)胞健康，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^(guò)螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分，從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見(jiàn)的，可能會(huì)干擾依賴成像的實(shí)驗(yàn)分析。
產(chǎn)生沉淀的可能原因
1、溫度變化
在細(xì)胞培養(yǎng)中，溫度是引起沉淀的主要因素之一。當(dāng)遭遇溫度的極端變化時(shí)，高分子量血漿蛋白會(huì)從溶液中析出；熱失活和凍融循環(huán)能促進(jìn)蛋白降解和沉淀；因?yàn)橐后w或重組成培養(yǎng)基在使用之間保持冷藏儲(chǔ)存，鹽可能沉淀，尤其是10x或其他濃縮的儲(chǔ)存液。
2、失水誘導(dǎo)的濃度改變
如果培養(yǎng)基可能蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分(包括鹽) 的濃度將會(huì)增加，特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。
3、鈣鹽
制備無(wú)血清培養(yǎng)基時(shí)，組分添加的順序可能導(dǎo)致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀，比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應(yīng)產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定會(huì)加劇這一問(wèn)題。
4、金屬補(bǔ)充物
銅、鐵和鋅等金屬離子是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的，是無(wú)血清培養(yǎng)基的重要補(bǔ)充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導(dǎo)致這些金屬沉淀，為細(xì)胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時(shí))，碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物；在氧化條件下，銅和鋅更易于沉淀。
金屬沉淀物及對(duì)應(yīng)顏色：
硫化亞銅（I）：黑色
氧化銅（I）：黑色
氧化亞鐵（I）：黑色
硫化亞鐵（II）：黑色
氫氧化銅（II）：藍(lán)色
磷酸亞鐵（II）：藍(lán)色
胱氨酸亞銅：藍(lán)-灰色
碳酸銅（II）：藍(lán)-深綠色
氯氧化銅（II）：藍(lán)-綠色
醋酸鐵（III）：棕色
碳酸鈣：無(wú)色
氫氧化鋅：無(wú)色
磷化亞銅（I）：灰-黑色
氧化鎂：灰-綠色或棕-黑色
三氧化二鐵（III）：紅-黑色
氫氧化鐵（III）：紅-棕色
碳酸錳：玫瑰色
磷酸鋅：灰色
磷酸鈣：白色
磷酸鎂：白色
氫氧化鎂：白色
過(guò)氧化鎂：白色
焦磷酸鎂：白色
碳酸鋅：白色
氧化鋅：白色
硫化鋅：白色
碳酸亞銅（I）：黃色
氫氧化亞銅（I）：黃色
過(guò)氧化鋅：黃色
5、污染
培養(yǎng)物渾濁可能是細(xì)菌或真菌污染造成的。
細(xì)胞培養(yǎng)沉淀的常見(jiàn)原因和解決方案
