質(zhì)控菌株的保藏 - 5種普通菌種保藏方法介紹
發(fā)布時(shí)間：2022-08-31 瀏覽次數(shù)：2751
菌種保藏原則
用低溫、干燥和隔絕空氣等方法可以使微生物代謝能力降低。因此，采用適宜的方法對(duì)菌種進(jìn)行保藏，可以確保菌種在一定時(shí)間內(nèi)存活并且不被污染、不產(chǎn)生變異，使菌種保持原有的活性以及生理生化等遺傳特性。
普通菌種保藏方法
① 傳代培養(yǎng)保藏法
將菌種接種到適宜的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后，放置于4°C冰箱中保存，并每隔一定時(shí)間進(jìn)行傳代。根據(jù)菌種生長(zhǎng)的不同要求，可分為斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。
此方法是多數(shù)實(shí)驗(yàn)室常用的菌種保藏方法，具有操作簡(jiǎn)單、使用方便的優(yōu)點(diǎn)。但多次傳代會(huì)使微生物發(fā)生變異，而且污染雜菌的機(jī)會(huì)也相對(duì)較多。
② 液體石蠟保藏法
此方法是傳代培養(yǎng)的變相方法。在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可以防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可以阻止氧氣進(jìn)入，從而適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間。但此方法對(duì)于某些可以同化烴類的微生物則不宜使用。
此方法實(shí)用而且效果好。而且制作簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備，不需要經(jīng)常傳代。但保存時(shí)必須直立放置，所占位置較大，不便于攜帶。
③ 真空冷凍干燥法
將菌種在極低溫度(-70°C左右)下快速冷凍，然后利用減壓使其中的水分升華，達(dá)到干燥的目的。微生物培養(yǎng)物經(jīng)過該方法處理后處于一種低溫、 干燥、缺氧的條件下，因而他們代謝是相對(duì)靜止的，可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。除不產(chǎn)孢子只產(chǎn)生菌絲體的絲狀真菌不宜采用該方法外，其他如病毒、細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌等都可以采用該方法，且效果較好。一般真空冷凍干燥需加入保護(hù)劑，如牛乳、血清、糖類(葡萄糖、半乳糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、蜜二糖、棉籽糖、糊精等)、甘油、山梨醇、氨基酸類(谷氨酸、精氨酸、蘋果酸)、維生素C (抗壞血酸)、明膠、蛋白胨等一種或多種物質(zhì)。
此方法是菌種保藏方法中最有效的方法之一，適用于菌種長(zhǎng)期保存，一般可保存幾年至十幾年，但設(shè)備和操作要求都比較復(fù)雜。
④ 砂土管保藏法
將斜面上的新鮮培養(yǎng)物制成菌懸液或孢子懸液，然后將懸液無(wú)菌注人已滅菌好的砂土管中，使細(xì)胞或孢子吸附在砂子載體上。置于干燥器中干燥后加以保存。
此方法多用于能產(chǎn)生孢子的微生物如霉菌、放線菌的保存，可保存2年左右。
⑤ 液氮保存
將保存的菌種用保護(hù)劑制成菌懸液密封于安瓿瓶?jī)?nèi)，迅速冷凍后，貯藏于-150°C ~ -196°C的液氮超低溫冰箱中。該方法優(yōu)點(diǎn)是保藏時(shí)間長(zhǎng)，有些菌種保存期達(dá)9年以上。
此方法除適宜于一般微生物的保藏外， 對(duì)一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細(xì)菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動(dòng)物細(xì)胞均可長(zhǎng)期保藏，而且性狀不變異。缺點(diǎn)是需要特殊設(shè)備。
