Hela細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作步驟
發(fā)布時(shí)間：2023-05-18 瀏覽次數(shù)：604
1. 觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時(shí)擰緊蓋子。
2. 加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。
3. 打開(kāi)超凈臺(tái)(先開(kāi)風(fēng)機(jī)，后開(kāi)照明)，用75%乙醇清潔臺(tái)面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個(gè)，置于架子上。
4. 取尖吸管、吸量管各一支，放置在專(zhuān)用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
5. 取待傳代的細(xì)胞。打開(kāi)versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時(shí)距離酒精燈心遠(yuǎn)些，不要把渣滓?guī)нM(jìn)去。把試劑拿入臺(tái)子的時(shí)候，盡量平穩(wěn)，不要讓試劑碰到瓶口。
6. 用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基，置離心管中，吸量管加入versene，然后將versene瓶收起來(lái)。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時(shí)都不要對(duì)著細(xì)胞。
7. 打開(kāi)胰酶，然后將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后，盡快放平，使細(xì)胞消化時(shí)間一致。
8. 將細(xì)胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打開(kāi)PBS. 之后拿出來(lái)鏡下隨時(shí)觀察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細(xì)胞。別忘了用舊培養(yǎng)基中和。
9. 取細(xì)胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后(細(xì)胞變圓，但不漂起)，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細(xì)胞，吹打，至所有細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來(lái)。用PBS洗細(xì)胞，versene對(duì)細(xì)胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。
10. 吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。
11. 細(xì)胞離心畢，用吸新培養(yǎng)基的管棄去上清，先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管，小體積混勻，將細(xì)胞重懸，尖吸管吹勻。
12. 擦計(jì)數(shù)板，用槍吸10ul的液體，計(jì)數(shù)。不要把槍伸到離心管內(nèi)。
13. 吸量管吸取細(xì)胞懸液，加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈臺(tái)。
