金黃色葡萄球菌檢測標準要點解析
發(fā)布時間：2023-05-30 瀏覽次數(shù)：1137
第一法 金黃色葡萄球菌定性檢驗
1、7.5%氯化鈉肉湯培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)：
（1）若樣品本身在均質(zhì)后清澈，培養(yǎng)18h觀察呈現(xiàn)一定程度的渾濁（與培養(yǎng)前相比），則接種平板；若18h后仍無變化，繼續(xù)培養(yǎng)至24h后無論渾濁與否都接種至平板；
（2）若樣品本身在均質(zhì)后渾濁，則直接培養(yǎng)至24h后再接種平板。
2、血平板：36±1℃培養(yǎng)18h后觀察，若有菌落生長或有菌落生長的跡象（無論是否溶血），則應(yīng)酌情配制NA、BHI并分裝至小試管中（NA 10mL/管、BHI 5mL/管）、滅菌后NA應(yīng)斜放凝固成瓊脂斜面?zhèn)溆?。至血平板培養(yǎng)至24h取出，挑取菌落進行革蘭氏染色鏡檢，同時挑取菌落接種至NA斜面、BHI肉湯管，36±1℃培養(yǎng)24h。
3、接種原則：
（1）革蘭氏染色后還剩余10個或10個以上菌落，則NA、BHI分別接種5管；
（2）若多于5個（不包括5個）不足10個，則BHI接種5管，剩余的接種NA；
（3）5個及以下則全部接種BHI，不接種NA。
4、BP平板：36±1℃培養(yǎng)24h后觀察，有菌落生長則取出，無菌落生長則繼續(xù)培養(yǎng)至48h后再觀察。若血平板已挑取菌落進行證實試驗，則不必再挑取BP平板上的菌落進行實驗。 若血平板上無菌落生長，則應(yīng)在24h～48h內(nèi)逐步觀察BP平板是否長菌或有無長菌跡象，有則需配置BHI及NA，挑取BP上的菌落進行純化、增菌，36±1℃培養(yǎng)24h。
5、血漿凝固酶試驗：
（1）根據(jù)BHI管數(shù)，取凍干血漿粉，每瓶用移液槍加入0.5mL生理鹽水，使其充分溶解，再換移液槍槍頭取0.3mL BHI培養(yǎng)物加入其中（每管BHI用1個槍頭），振蕩搖勻后于36±1℃培養(yǎng)，計時，每30min觀察一次，如呈現(xiàn)凝固（將試管傾斜或倒置時出現(xiàn)凝塊）或半凝固（一般的液體呈現(xiàn)凝固）則判定為陽性。若一直不凝固，則一直觀察，直至觀察至6h（查看12次）還未凝固，則試驗終止，判定為陰性結(jié)果；若中途出現(xiàn)完全凝固或半凝固，則試驗終止，判定為陽性結(jié)果。
（2）同時取金黃色葡萄球菌標準菌株（ ATCC6538 以及 CMCC(B)26003 各一支 ）制成菌懸液后作為陽性對照、以滅菌生理鹽水為陰性對照，分別接種至BHI中同步培養(yǎng)后進行血漿凝固酶試驗。
（3）若血漿凝固酶試驗結(jié)果可疑，則挑取NA上的菌落接種BHI再次進行試驗。
第二法 金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法
1、取1mL樣品稀釋勻液接種3個BP平板（此處并未嚴格按照標準中0.3mL、0.3mL、0.4mL精確取樣，由于如此操作會增加試驗時間，無法在15min內(nèi)完成試驗）。
2、涂布時不要觸及平板邊緣（會導致樣液涂抹不均勻，大部分匯集于邊緣）。
3、可用同一根涂布棒從低稀釋度到高稀釋度進行涂布（不用換涂布棒）。
4、涂布完成后應(yīng)稍微放置一段時間使培養(yǎng)基吸收樣品勻液。
5、若水珠較多，可正置于培養(yǎng)箱中1～2h后再倒置培養(yǎng)。
6、36±1℃培養(yǎng)24h后觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗（革蘭氏染色鏡檢、血漿凝固酶試驗、劃線血平板）。若無菌落生長則繼續(xù)培養(yǎng)至48h后再觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗，無典型菌落生長則試驗終止。
第三法 金黃色葡萄球菌MPN計數(shù)法
1、樣品稀釋同菌落總數(shù)，取3個連續(xù)稀釋度稀釋液（或包括液體樣品原液），每個稀釋度接種3管7.5%氯化鈉肉湯管，每管接種1mL，36±1℃培養(yǎng)18h后觀察，若出現(xiàn)渾濁則接種至BP平板，若無變化則繼續(xù)培養(yǎng)至24h后再接種至BP平板。
2、劃線接種至BP平板，36±1℃培養(yǎng)24h后觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗（革蘭氏染色鏡檢、血漿凝固酶試驗、劃線血平板）。若無菌落生長則繼續(xù)培養(yǎng)至48h后再觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗，無典型菌落生長則試驗終止。
3、根據(jù)證實后的陽性管數(shù)差MPN表得出結(jié)果。
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