RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)方法及注意事項
發(fā)布時間：2023-06-25 瀏覽次數(shù)：6563
來源：“逍鵬生物”公眾號
原標(biāo)題：逍鵬講堂 ‖ 如何養(yǎng)好RAW 264.7細(xì)胞
RAW 264.7 是實(shí)驗(yàn)室小伙伴經(jīng)常遇到的細(xì)胞，
但培養(yǎng) RAW 264.7普遍會遇到的一個問題：
養(yǎng)著養(yǎng)著，就分化了！
本期小編就培養(yǎng)RAW 264.7應(yīng)注意的細(xì)節(jié)，
逐一為大家“避坑”，
Let's start！
細(xì) 胞 介 紹
每一種細(xì)胞都有自己的“脾氣”，RAW 264.7更是如此，要想養(yǎng)好它，首先我們得充分了解它，比如生長特點(diǎn)、細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)體系等，在這基礎(chǔ)上，養(yǎng)好它自然也是“水到渠成”。
- RAW 264.7 生長圖片 -
英文名稱：RAW 264.7
中文名稱：小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞
種屬：鼠源
組織來源：Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞
生長特性：貼壁生長（胰酶會刺激分化）
細(xì)胞形態(tài)：不規(guī)則性（圓形和梭形為主）
傳代比例：1:2 - 1:3
換液頻率：2-3次/周
培養(yǎng)體系：DMEM高糖 +10% 特級胎牛血清 +1% 雙抗
培養(yǎng)條件：5% CO2；37℃
正 確 傳 代 方 法
RAW264.7細(xì)胞具有強(qiáng)吞噬能力，細(xì)胞在吞噬抗原后釋放趨化因子，促使細(xì)胞分化出偽足，因此造成細(xì)胞難消化。
RAW 264.7在傳代過程中，不需要使用酶進(jìn)行消化，酶消化會加速細(xì)胞的分化?，F(xiàn)在比較常見的是吹打傳代，此方法易于操作，也能很好地控制細(xì)胞的分化。
< 傳代的步驟 >
第一步：
用移液管將培養(yǎng)基中的培養(yǎng)液吸干凈。
第二步：
用 PBS 將細(xì)胞層清洗1至2遍。
第三步：
用移液管吸取新鮮的培養(yǎng)基輕輕將細(xì)胞吹打下來，并將細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液，注意吹打的力度，避免過重或者過輕。
第四步：
將吹打好的單細(xì)胞懸液進(jìn)行分裝接種。
注 意 事 項
1、根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，RAW264.7三天就可能分化，吹下的難度也大大增加，通過及時傳代將RAW 264.7的分化比例控制在合理的范圍內(nèi)。
2、該細(xì)胞不建議使用胰酶消化，胰酶會刺激分化，超過3天不傳代細(xì)胞容易分化。培養(yǎng)時，存在少量分化細(xì)胞，屬于正?，F(xiàn)象。
3、推薦使用吹打傳代，可以有效控制細(xì)胞分化。
4、當(dāng)細(xì)胞的密度達(dá)到80%-90%的時候，最容易吹下；密度較低，不太好吹下來。
5、接種的密度需要控制好，推薦進(jìn)行高比例的傳代。
6、推薦使用高質(zhì)量的胎牛血清，血清的質(zhì)量差異會導(dǎo)致貼壁能力的變化。
7、隨著培養(yǎng)時間的增加，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。當(dāng)細(xì)胞的密度增加到一個“臨界點(diǎn)”的時候，會有細(xì)胞散落到培養(yǎng)基中，此時懸浮和貼壁的細(xì)胞會同時出現(xiàn)在視野中 。
8、由于堆積生長，有些細(xì)胞脫落漂浮，在傳代時應(yīng)收集起來，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
9、切勿強(qiáng)制吹下所有的細(xì)胞，貼壁較牢或已分化的細(xì)胞可丟棄，就只需接種較容易吹打下來的未分化的細(xì)胞即可。
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