水中總大腸菌群檢驗方法中培養(yǎng)基成分分析及作用
發(fā)布時間：2024-04-24 瀏覽次數：853
培養(yǎng)基是微生物檢驗中常用的一種實驗室試劑，主要用于提供微生物生長所需的營養(yǎng)、能量、生長因子等物質和適宜的生長環(huán)境。常見的培養(yǎng)基種類很多，根據不同的需求可以選擇不同類型的培養(yǎng)基。
具體來說，培養(yǎng)基在微生物檢驗中的作用包括：
1. 提供營養(yǎng)物質：培養(yǎng)基中含有細菌或真菌所需的碳源、氮源、磷源、微量元素、維生素等營養(yǎng)物質，能夠滿足微生物的生長和繁殖需要。
2. 提供生長因子：某些微生物需要特殊的生長因子才能生長，如某些細菌需要血紅蛋白、NAD等，培養(yǎng)基可以添加這些生長因子以促進微生物的生長。
3. 維持適宜的生理狀態(tài)：培養(yǎng)基可以調節(jié)pH值、溫度、氧氣濃度、鹽度等因素，使微生物處于適宜的生理狀態(tài)，促進其生長和繁殖。
4. 檢測微生物數量：通過培養(yǎng)基上的特定反應，如酶底物法、品紅亞硫酸鈉法等，可以檢測微生物的數量和質量。
總之，培養(yǎng)基是微生物檢驗中必不可少的一種實驗室試劑，能夠提供微生物所需的營養(yǎng)和環(huán)境，促進其生長和繁殖，從而為微生物檢驗提供了必要的條件。在新版的 GBT 5750.12-2023《生活飲用水標準檢驗方法 第12部分：微生物指標》中提供了三種總大腸菌群的檢驗方法，其培養(yǎng)基的成分作用如下：
一、多管發(fā)酵法
1.1 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液成分及其作用如下：
a) 蛋白胨：提供細菌所需的氮源和碳源，促進細菌的生長。
b) 牛肉膏：提供多種氨基酸和營養(yǎng)物質，促進細菌的生長。
c) 乳糖：為大腸桿菌等腸道細菌提供碳源，促進它們的代謝。
d) 氯化鈉：調節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，保證培養(yǎng)基中的離子平衡。
e) 溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L)：是一種指示劑，將在發(fā)酵過程中變色，用于判斷菌落形成和數量。
f) 純水：作為培養(yǎng)基的溶劑，保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。
這些成分共同作用，能夠提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，促進水中總大腸菌群的生長和繁殖，并且通過溴甲酚紫乙醇溶液的變色反應，可以判斷菌落形成和數量。
1.2 伊紅美藍培養(yǎng)基各成分的作用如下：
a) 蛋白胨：為細菌提供氮源和碳源，促進細菌的生長。
b) 乳糖：為大腸桿菌等腸道細菌提供碳源，促進它們的代謝。
c) 磷酸氫二鉀：調節(jié)培養(yǎng)基的pH值，使其維持在適宜的范圍內。
d) 瓊脂：作為凝膠劑，使得培養(yǎng)基能夠固化。
e) 純水：作為培養(yǎng)基的溶劑，保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。
f) 伊紅水溶液(20.0 g/L)：是一種指示劑，將在發(fā)酵過程中變色，用于判斷菌落形成和數量。
g) 美藍水溶液(5.0 g/L)：也是一種指示劑，將在發(fā)酵過程中變色，用于判斷菌落形成和數量。
這些成分共同作用，能夠提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，促進水中總大腸菌群的生長和繁殖，并且通過伊紅美藍指示劑的變色反應，可以判斷菌落形成和數量。
二、濾膜法
2.1 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基各成分的作用如下：
a) 蛋白胨：為細菌提供氮源和碳源，促進細菌的生長。
b) 酵母浸膏：提供多種維生素和微量元素，促進細菌的生長。
c) 牛肉膏：為細菌提供營養(yǎng)和生長因子，促進細菌的生長。
d) 乳糖：為細菌提供碳源和能量，促進細菌的生長。
e) 瓊脂：作為培養(yǎng)基的凝膠劑，使培養(yǎng)基凝固。
f) 磷酸氫二鉀：調節(jié)培養(yǎng)基的pH值，使其維持在適宜的范圍內。
g) 無水亞硫酸鈉：具有抗氧化作用，保護培養(yǎng)基中的細菌不被氧化破壞。
h) 堿性品紅乙醇 [φ (C2H5OH)=95 %]溶液（50.0 g/L）：是一種指示劑，能夠區(qū)分產酸和產氣的細菌，使其呈現紅色或粉紅色。
i) 純水：作為培養(yǎng)基的溶劑，保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。
這些成分共同作用，能夠提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，促進水中總大腸菌群的生長和繁殖。通過品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基的特殊配方，能夠區(qū)分產酸和產氣的細菌，并且使其呈現紅色或粉紅色，從而進行總大腸菌群的檢測。
三、酶底物法
3.1、MMO-MUG培養(yǎng)基各成分的作用如下：
a) 硫酸銨：提供氮源，促進細菌的生長。
b) 無水硫酸錳：作為酶的輔因子，促進酶在催化反應過程中的活性。
c) 無水硫酸鋅：作為酶的輔因子，促進酶在催化反應過程中的活性。
d) 無水硫酸鎂：提供鎂離子，促進酶的活性。
e) 氯化鈉：調節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，保證細胞內外的離子平衡。
f) 氯化鈣：提供鈣離子，促進細菌的生長。
g) 亞硫酸鈉：具有抗氧化作用，保護培養(yǎng)基中的酶不被氧化破壞。
h) 兩性霉素 B（Amphotericin B）：是一種抗真菌藥物，用于防止培養(yǎng)基中的真菌污染。
i) 鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）：是一種酶底物，在酶的作用下會被分解，產生黃色產物，用于檢測細菌的數量。
j) 4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）：也是一種酶底物，在酶的作用下會被分解，產生藍色產物，用于檢測細菌的數量。
k) 茄屬植物萃取物（Solanium 萃取物）：為細菌提供營養(yǎng)和生長因子，促進細菌的生長。
l) N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽（HEPES 鈉鹽）：調節(jié)培養(yǎng)基的pH值，使其維持在適宜的范圍內。
m) N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸（HEPES）：同樣用于調節(jié)培養(yǎng)基的pH值。
n) 純水：作為培養(yǎng)基的溶劑，保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。
這些成分共同作用，能夠提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，促進水中總大腸菌群的生長和繁殖，并且通過ONPG和MUG酶底物的分解反應，能夠產生黃色或藍色產物，用于檢測細菌的數量。
原標題：“方法解讀1：水中總大腸菌群檢驗方法中的培養(yǎng)基”
來源：環(huán)凱轉載于“遼寧水協(xié)”公眾號，內容版權歸原作者所有。
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