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我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位檢驗(yàn)雙歧桿菌的需求及情況，對雙歧桿菌檢驗(yàn)相應(yīng)的培養(yǎng)基進(jìn)行了改進(jìn)，使得雙歧桿菌檢出率較之前有很大的改進(jìn)。擴(kuò)充并完善了相關(guān)的微生物檢測試劑，使得技術(shù)操作人員能更準(zhǔn)確、快捷的檢測出目標(biāo)菌。
現(xiàn)我公司，依據(jù)GB 4789.34-2012食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)雙歧桿菌檢驗(yàn)，推出成套的雙歧桿菌檢驗(yàn)解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗(yàn)單位提供方便。
圖1：GB 4789.34-2012雙歧桿菌檢驗(yàn)流程圖
表1：實(shí)驗(yàn)操作所用培養(yǎng)基及生化試劑
|
功能階段 |
實(shí)驗(yàn) |
產(chǎn)品序號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
類別 |
|
稀釋液 |
1 |
CP0630 |
生理鹽水 |
225mL×10袋 |
盒（袋裝） |
|
平板分離 |
2 |
027330 |
雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基（BBL瓊脂培養(yǎng)基） |
250g |
瓶（干粉） |
|
生理生化 |
3 |
029010 |
革蘭氏染色液 |
10mL×4支 |
盒 |
|
4 |
029161 |
過氧化氫酶試劑 |
2mL×10支 |
盒（西林瓶） | |
|
5 |
027340 |
PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) |
250g |
瓶（干粉） | |
|
SR0300 |
PYG液體培養(yǎng)基配套試劑 |
2種×5支/盒 |
盒（西林瓶） | ||
|
6 |
027350 |
TPY液體培養(yǎng)基 |
250g |
瓶（干粉） | |
|
7 |
029010 |
革蘭氏染色液 |
10mL×4支 |
盒 | |
|
8 |
029080 |
甘油 |
2mL×10支 |
盒（西林瓶） | |
|
9 |
075060 |
D-阿拉伯糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
10 |
075400 |
D-核糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
11 |
075070 |
D-木糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
12 |
075080 |
D-半乳糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
13 |
075010 |
D-葡萄糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
14 |
075550 |
D-果糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
15 |
075380 |
D-甘露糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
16 |
075110 |
L-鼠李糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
17 |
075100 |
衛(wèi)矛醇 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
18 |
075120 |
肌醇 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
19 |
075040 |
甘露醇 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
20 |
075090 |
山梨醇 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
21 |
075160 |
七葉靈（七葉苷） |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
22 |
075140 |
水楊甙（水楊苷，水楊素） |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
23 |
075570 |
D-纖維二塘 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
24 |
075030 |
D-麥芽糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
25 |
075020 |
D-乳糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
26 |
075560 |
D-蜜二糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
27 |
075050 |
D-蔗糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
28 |
075530 |
D-海藻糖（覃糖） |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
29 |
075540 |
菊糖（菊根粉） |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
30 |
075430 |
D-松三糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
31 |
075230 |
D-棉籽糖 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
32 |
075480 |
淀粉 |
20支 |
盒（西林瓶） | |
|
33 |
075420 |
D-松二糖 |
20支 |
盒（西林瓶） |
GB 4789.34-2012食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 雙歧桿菌檢驗(yàn) 操作步驟
1 樣品制備
1.1 樣品的全部制備過程均應(yīng)遵循無菌操作程序。
1.2 以無菌操作稱取25 g(mL)樣品，置于裝有225 mL 生理鹽水的滅菌錐形瓶內(nèi)，制成1:10 的樣品勻液。
2 稀釋及涂布培養(yǎng)步驟
2.1 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1.0 mL，沿管壁緩慢注于裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀釋液)，振搖試管或換用1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。
2.2 另取1 mL 無菌吸管或微量移液器吸頭，按5.2.1 操作順序，做10 倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1 次1 mL 滅菌吸管或吸頭。
2.3 根據(jù)待鑒定菌種的活菌數(shù)，選擇三個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1 mL 稀釋液，用L棒在雙歧桿菌瓊脂平板進(jìn)行表面涂布, 每個稀釋度作兩個平皿。置36 ℃±1 ℃ 溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h±2 h，培養(yǎng)后選取單個菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。
3 純培養(yǎng)
挑取3 個或以上的菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板，厭氧，36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)48 h。
4 鏡檢及生化鑒定
4.1 涂片鏡檢
雙歧桿菌菌體為革蘭氏染色陽性，不抗酸、無芽孢，無動力，菌體形態(tài)多樣，呈短桿狀、纖細(xì)桿狀或球形，可形成各種分支或分叉形態(tài)。
4.2 生化鑒定
過氧化氫酶試驗(yàn)為陰性。選取純培養(yǎng)平板上的三個單個菌落，分別進(jìn)行生化反應(yīng)檢測，不同雙歧桿菌菌種主要生化反應(yīng)見國標(biāo)附錄B。
5 有機(jī)酸代謝產(chǎn)物測定
氣相色譜法測定雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物, 見國標(biāo)附錄C。
6 報(bào)告
根據(jù)鏡檢及生化鑒定的結(jié)果(4)、雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物乙酸與乳酸微摩爾之比大于1(5)，報(bào)告雙歧桿菌屬的種名。
相關(guān)國標(biāo)下載地址：
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GB 4789.34 —x 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 雙歧桿菌的鑒定 |
