培養(yǎng)基無法凝固常見的原因
發(fā)布時間：2022-12-05 瀏覽次數(shù)：24260
微生物培養(yǎng)基用來實驗室培養(yǎng)細(xì)菌、真菌等微生物，通常有固體和液體兩種類型。液體培養(yǎng)基又通常稱為肉湯，而固體培養(yǎng)基通常稱之為瓊脂培養(yǎng)基，這是因為固體培養(yǎng)基當(dāng)中通常添加了瓊脂成分，起到凝固培養(yǎng)基的作用。
瓊脂：又叫瓊膠，為無色、無固定形狀的固體，溶于熱水。瓊脂最有用的特性是它的凝點(diǎn)和熔點(diǎn)之間的溫度相差很大。它在水中需加熱至95℃時才開始熔化，熔化后的溶液溫度需降到40℃時才開始凝固?；诃傊倪@些特性，其在生物實驗室中有著廣泛的應(yīng)用，例如制作微生物培養(yǎng)基的凝固劑，作為瓊脂糖凝膠電泳時的電泳支持介質(zhì)等等。
但是配置培養(yǎng)基時，培養(yǎng)基通常會出現(xiàn)配置之后呈現(xiàn)流體，半流體不能凝固的狀態(tài)，難以凝固，以下是一些常見的培養(yǎng)基無法正常凝固的原因。
1 瓊脂添加量較少
自行配置培養(yǎng)基時，需要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配置的配方比例進(jìn)行，固體培養(yǎng)基配置時通常保證每升添加12g以上的瓊脂量。配置半固體培養(yǎng)基時，通常會減少瓊脂額用量，所以如果瓊脂用量少的話，會影響培養(yǎng)基的凝固，無法形成固體。
2 使用劣質(zhì)瓊脂
同上，因為瓊脂是影響培養(yǎng)基凝固的關(guān)鍵，所以使用質(zhì)量不好的、過期的、變質(zhì)的瓊脂，同樣會影響培養(yǎng)基的凝固效果。
3 pH值不準(zhǔn)確
這點(diǎn)是很多人配置培養(yǎng)基過程中會忽略的因素。配置的培養(yǎng)基最好保持在5-10的pH區(qū)間，pH過低時，會導(dǎo)致培養(yǎng)基酸化，影響瓊脂的凝固效果。通常來說，按照正常流程進(jìn)行配置都能保證pH在正常范圍內(nèi)，但是仍然有一些因素可能導(dǎo)致pH變化，值得注意。
例如，使用的水pH過低，所以盡量使用桶裝水較好。另外，滅菌前后去測量的話，也會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基pH有降低的情況，這主要是因為在長時間的高溫情況下，會導(dǎo)致培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)分解，成分改變，從而影響pH；因此不同培養(yǎng)基因為成分有所差異，滅菌前后pH變化也并不一致，另外含有緩沖劑的培養(yǎng)基其pH變化會較小。因此通常建議配置培養(yǎng)基時，先把培養(yǎng)基pH值調(diào)到比原來略高0.4-0.5的值。
4 培養(yǎng)基未完全溶解
例如在配置時直接使用冷水進(jìn)行溶解，瓊脂只溶于熱水而無法溶于冷水，使用冷水進(jìn)行溶解不能使瓊脂完全溶解和分散均勻。
使用熱水進(jìn)行溶解，但也并未煮沸，一定要煮沸，保證完全溶解之后再去分裝滅菌。滅菌結(jié)束之后倒平板的時候，也建議一定要先進(jìn)行搖勻再倒板，否則可能會出現(xiàn)前面倒的板子凝固不好，而后面的板子才能凝固的情況。
5 加熱過度
加熱過度一般是指滅菌溫度過高，或者時間過長，或者反復(fù)多次進(jìn)行加熱溶解。先前說過滅菌過后，培養(yǎng)基內(nèi)成分會發(fā)生一些變化，特別是在過度的加熱過后，可能會影響培養(yǎng)基的凝固，同時因為營養(yǎng)成分較大的變化，對實驗結(jié)果也會產(chǎn)生影響，因此不建議反復(fù)過度的加熱和滅菌。
6 環(huán)境溫度
環(huán)境本身溫度過高，例如在一些悶熱的空間，或者較高溫度的夏天時，培養(yǎng)基不能很好的凝固。因此建議可以適當(dāng)?shù)奶岣攮傊褂玫牡谋壤?，以更好地使培養(yǎng)基凝固。
以上是一些培養(yǎng)基無法凝固常見的原因。其實總結(jié)來看基本都和瓊脂有關(guān)，可能是因為瓊脂添加較少，或者未完全溶解，或者因為極端的溫度或Ph條件被破壞。因此比起自己按照不同成分比例配置培養(yǎng)基，選擇商業(yè)化的培養(yǎng)基或許是個更好的選擇，因為都是配置好的比例，能更好保證瓊脂量的準(zhǔn)確。另外，正常配置的情況下Ph值也更為穩(wěn)定。
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