一文帶您看懂革蘭氏染色
發(fā)布時(shí)間：2023-06-20 瀏覽次數(shù)：13348
1884年丹麥學(xué)者革蘭（C.Gram）根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造和化學(xué)成分的特點(diǎn)，通過(guò)染色表現(xiàn)出脫色能力的不同，將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性菌與革蘭氏陰性菌兩大類，創(chuàng)立了革蘭氏染色法，迄今仍是細(xì)菌學(xué)中極其重要的一種鑒別染色法。
革蘭氏染色方法：一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟。
具體操作：
1、將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液。染1min，水洗。
2、滴加碘液，作用1min。水洗。
3、滴加脫色酒精，約30s；或?qū)⒚撋凭螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用95%酒精滴滿整個(gè)涂片，脫色10s。
4、水洗，滴加沙黃復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗，待干，鏡檢。
革蘭氏染色的結(jié)果解析
革蘭氏染色的結(jié)果：革蘭氏陽(yáng)性呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色（圖1）。
圖1 革蘭氏染色結(jié)果（左：革蘭氏陽(yáng)性，右：革蘭氏陰性）
為什么會(huì)是這樣的結(jié)果？
這與細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁含有較厚的肽聚糖層，交聯(lián)度高，不含類脂層；而革蘭氏陰性菌肽聚糖層薄，交聯(lián)度低，且類脂層（脂多糖、磷脂、脂蛋白）含量高。（圖2）
圖2 革蘭氏陽(yáng)性菌與陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的比較
通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，而G+和G-細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)對(duì)結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的物理阻留能力不同。乙醇脫色處理后，G+細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖網(wǎng)孔收縮，將結(jié)晶紫-碘復(fù)合物阻留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)革蘭氏染色顯示藍(lán)紫色。而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇乙醇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃復(fù)染，就顯示紅色。
操作細(xì)節(jié)說(shuō)明：
1、控制好每一階段的染色時(shí)間和脫色時(shí)間，染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或脫色時(shí)間過(guò)短可能導(dǎo)致假陽(yáng)性，染色時(shí)間短或脫色長(zhǎng)可能導(dǎo)致假陰性。
2、選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌，此時(shí)菌最為活躍，活力較強(qiáng)，（一般培養(yǎng)至18-24h的菌）。若培養(yǎng)時(shí)間過(guò)久，菌已經(jīng)老化，處于衰亡期，細(xì)菌細(xì)胞壁通透性增加，容易將原本G+細(xì)菌染成了G-菌。
3、制片不可過(guò)厚，挑取少量菌苔研磨成一薄膜固定。若菌苔過(guò)厚，菌體層層堆疊、毫無(wú)縫隙，加之細(xì)胞壁成分影響脫色效果，會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性的結(jié)果，同時(shí)鏡檢視野中菌體連片，分辨不出其菌體細(xì)胞形態(tài)，影響觀察。
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