平板集落形成實驗、軟瓊脂集落形成實驗介紹
發(fā)布時間：2023-08-23 瀏覽次數(shù)：1314
細胞集落形成是檢測培養(yǎng)細胞增殖能力的有效方法，通過計算集落形成率，來測定測試細胞的增殖能力。
實驗前準備：6孔板、吸管、槍頭、血球計數(shù)板、基質(zhì)膠等放入超凈工作臺消毒30min。
1、平板集落形成實驗(適用于貼壁細胞)
① 取出貼壁率 > 90%的細胞(處于對數(shù)生長期)，消化離心，重懸細胞并進行細胞計數(shù)。
② 6孔板種板：實驗分組，每個孔中加入1000個細胞，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
③ 培養(yǎng)1周后，當肉眼可見集落形成時，取出6孔板，棄除培養(yǎng)液，每孔加入2mL甲醇固定30min，棄除甲醇，每孔加入2mL 0.1%結(jié)晶紫染色3min，然后清洗掉結(jié)晶紫，數(shù)碼相機拍照，光鏡下計數(shù)集落
結(jié)果如下：
2、軟瓊脂集落形成實驗(適用于懸浮細胞)
1. 收集對數(shù)生長期的細胞進行活細胞計數(shù)，然后調(diào)整細胞濃度，用含20%FBS的DMEM制成1000活細胞/ml的細胞懸液。
2. 用蒸餾水制備1.2%、0.7%兩個濃度的低熔點瓊脂糖，高壓滅菌后，維持在40℃不會凝固；
3. 1.2%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作為底層瓊脂，置CO2溫箱中備用；
4. 0.7%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，再加入細胞懸液充分混勻，RT凝固作為上層瓊脂，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標記。在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。
5. 然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進行培養(yǎng)。
6. 培養(yǎng)7～10天，肉眼觀察并計數(shù)細胞集落。
結(jié)果：
以肉眼可見的細胞團作為計數(shù)集落的標準。集落的計數(shù)和計算：集落數(shù)=n孔中細胞集落數(shù)總和/n孔，
集落形成率 = 集落數(shù)/接種培養(yǎng)細胞總數(shù)×100%
結(jié)果如下:
來源：“YuJinBio譽津醫(yī)學”公眾號，作者~Lisa。
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