PDRN如何參與增強細(xì)胞增殖人類皮膚成纖維細(xì)胞
發(fā)布時間：2023-12-14 瀏覽次數(shù)：953
眾所周知，核苷酸、核苷和嘌呤/嘧啶堿基在體外促進細(xì)胞增殖。然而，這種有絲分裂活性的分子機制仍存在爭議，因為據(jù)報道這些化合物既與生長因子協(xié)同，又直接作用于嘌呤能受體本身誘導(dǎo)增殖反應(yīng)；
多聚脫氧核糖核苷酸(PDRN)和腺苷能夠增加人皮膚成纖維細(xì)胞在原代培養(yǎng)中的生長速率。在微熒光研究中，我們觀察到PDRN和腺苷增加了胞質(zhì)鈣離子的濃度。我們的研究結(jié)果表明，PDRN可能作為一種前藥物，為培養(yǎng)細(xì)胞提供可檢測數(shù)量的有絲分裂脫氧核糖核苷酸、脫氧核糖核苷和堿基；
此外，PDRN誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖增強似乎部分是由A2A嘌呤受體的激活介導(dǎo)的。
實驗證實
為了研究PDRN刺激成纖維細(xì)胞增殖的機制，我們評估了它在原代培養(yǎng)中對人類皮膚成纖維細(xì)胞生長的影響，以及嘌呤受體在這種現(xiàn)象中的參與：我們重點關(guān)注了A2A嘌呤受體的作用，作為這種亞型，被報道是最有可能的刺激細(xì)胞增殖的介質(zhì)；
此外，我們還研究了鈣作為第二信使的作用，參與了 PDRN 對有絲分裂刺激的轉(zhuǎn)導(dǎo)。
實驗方式
（1）人類皮膚成纖維細(xì)胞來自7個不同的受試者，年齡在18歲到39歲之間。在分離程序后，成纖維細(xì)胞在加濕的培養(yǎng)箱中保持在37°C。5%的CO2培養(yǎng)基為杜爾貝科改良鷹培養(yǎng)基 (DMEM)雜交克隆，添加 10%胎牛血清特征化?？寺?FBS)、2nM谷氨酰胺、100 u/ml 青霉素、lOOUg鏈霉素；
（2）MTT檢測：成纖維細(xì)胞被鍍在24個多孔(Falcon)上，每孔密度15000，DMEM中添加10%胎牛血清；細(xì)胞附著3,4小時，然后剝奪血清。饑餓72h后，用含有 1%胎牛血清的 DMEM培養(yǎng)基喂養(yǎng)成纖維細(xì)胞進行增殖實驗；每天更換培養(yǎng)基，整個實驗期間都有藥物。MTT檢測細(xì)胞活力。簡單地說，細(xì)胞被孵育 4小時。用0.25 mg/ml 3(4,5 二甲基酸 2ol-2-yl)-2,5，二苯四溴銨(MTT)在無血清培養(yǎng)基中，37°C。在活細(xì)胞中，線粒體將MTT還原為一種藍(lán)色晶體的晶體。用二甲基亞砜求解氟烷，評估細(xì)胞活力。
實驗結(jié)果
圖1顯示了人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的時間過程，無論是在沒有或存在 10 卩 g/ml PDRN 的情況下， 使用 MTT 試驗進行評估。數(shù)值代表了 7 個不同實驗的平均值，這些實驗是使用從不同受試者獲 得的成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)獨立進行的。與未處理的對照組相比，PDRN 處理的細(xì)胞的生長速率顯 著提高。這種效應(yīng)在增殖 48 小時后已經(jīng)顯著，并持續(xù)了整個實驗的持續(xù)時間。
當(dāng)實驗在含有低比例胎牛血清（1%）的培養(yǎng)基中進行時，可以觀察到 PDRN 誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞生長的增加。
未經(jīng)處理或暴露于 10 gg/ml PDRN 的人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖模式。DMEM 1%胎牛血清每日改變，每天添加 PDRN。增殖試驗分別在 12、24、48、72、96、186h 后進行。在脫位長12小時后獲得的數(shù)據(jù)被認(rèn)為是基礎(chǔ)值，每個值都以基礎(chǔ)值的百分比表示。數(shù)據(jù)代表了7個exp的平均±SEM。一式四份地*p<0.05 和**p<0.01vs.基礎(chǔ)值。
實驗補充
PDRN增強的細(xì)胞增殖表現(xiàn)出濃度依賴性的反應(yīng)。處理2天后評價細(xì)胞活力，PDRN的營養(yǎng)效應(yīng)lOOpg/ml 時達(dá)到最大值（圖 2）。當(dāng)PDRN濃度達(dá)到500時，較高濃度的PDRN誘導(dǎo)的增殖效應(yīng)較小，細(xì)胞生長減少（數(shù)據(jù)未顯示）。
實驗總結(jié)
總之，在實驗?zāi)Ｐ椭?，我們提出PDRN可以刺激原代培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖，并激活A(yù)2嘌呤能受體似乎在這一現(xiàn)象中發(fā)揮著重要的作用，盡管不是排他性的。PDRN可以釋放廣泛的嘌呤和嘧啶化合物，在幾乎所有嘌呤受體上共享活性。自A2受體亞型可以刺激細(xì)胞增殖和組織修復(fù)，實驗數(shù)據(jù)進一步證明，在需要更有效的細(xì)胞增殖和組織修復(fù)時，使用PDRN作為治療藥物。
參考文獻：
POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDES ENHANCE THE PROLIFERATION
OF HUMAN SKIN FIBROBLASTS: INVOLVEMENT
OF A, PURINERGIC RECEPTOR SUBTYPES
Stefano Thellung , Tullio Florio, Albert0 Maragliano, Giulia Cattarini and Germaro Schettini
Institute of Pharmacology, School of Medicine, University of Genova; Service of Pharmacology,
National Institute for Cancer Research of Genova (IST); Unit of Neuroscience, Advanced
13iotechnology Center of Genova (CBA) L.go R. Benzi lo,16132 Genova
(Received in final form January 29,1999)
來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“PDRN研究所”公眾號，作者 — 小P所長 ；
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