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FZ008BF2-A 副溶血性弧菌(TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48test

英文名稱:Rapid Detection Kit for pathogenic Vibrio parahaemolyticus(TDH/TRH gene)(Fluorescent Probe Assays)

貨 號 :FZ008BF2-A

規(guī) 格 :48 測試/盒

用途:本試劑盒適用于水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌的快速定性檢測……

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微生物圖冊
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產品名稱:副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱:Rapid Detection Kit for pathogenic Vibrio parahaemolyticus(TDH/TRH gene)(Fluorescent Probe Assays)

產品編號與包裝規(guī)格:

編號規(guī)格
FZ008BF2-A48 測試/盒

產品簡介:本試劑盒適用于水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌的快速定性檢測以及耐熱直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)、耐熱直接溶血素相關溶血素 (thermostable direct hemolysin-related hemolysin,TRH)毒力基因的檢測。其他菌種檢驗需另按照國標《GB4789.7-2013 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗》開展。

檢測原理:基于 Real Time PCR 技術,利用針對于副溶血性弧菌和毒力基因 TDH 和 TRH 特異性基因的引物、熒光探針以及其他反應所需試劑,加入待檢樣品即可進行擴增反應。在發(fā)生擴增過程中,熒光探針與目的基因片段結合,可被Taq 酶分解并產生熒光信號,此時熒光定量PCR 儀可識別該熒光信號,同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應的實時擴增曲線,進而判定副溶血性弧菌和毒力基因是否檢出。

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產品組分:

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產品組分

儲存條件與保質期:-20℃避光儲存,有效期為 12 個月,避免反復凍融。

靈敏度:單通道最低檢驗限達到 100 CFU/Test。

所需其他材料和適用儀器:熒光定量 PCR 儀(具有能夠檢測 FAM、VIC、CY5 標記的熒光通道)、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南:

1,樣品前處理

1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備:
   a) 取 25 g(mL)待檢樣品,置于 225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水中,36 ℃±1 ℃前增菌8~18 h。
   b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min 離心 5 min,完全去除上清;
   c) 加入 30 μL 裂解液充分懸浮管底沉淀,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱 10 min。
   d) 12000 r/min 離心 15 min,上清即為待測樣品 DNA,靜置冰上,長時間不用應再次離心。

2) 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,充分懸浮于預先加有 30 μL 裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟 c)、d)操作。

2, 加樣、反應

   1) 按照需求取 n 個 PCR 反應管(n=1 管陰性對照+待檢測樣品數(shù)+1 管陽性對照),從試劑盒中取出預混液,充分融化,渦旋后短暫離心,以上每管加入20 μL預混液,待用。
   2) 向上述 n 個反應管中分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽性對照各 5 μL,總反應體積為 25 μL。蓋緊管蓋,短暫離心,立即進行 PCR 擴增反應。
   3) PCR 反應體系為 25 μL,取 FAM、VIC、Cy5 檢測通道,在反應階段 2 中 60℃時收集熒光信號,具體程序如下:

    注:在反應階段 2 中 60℃時收集熒光信號,對于多通道熒光 PCR 儀,取熒光素“FAM、VIC 和 CY5”為信號采集通道,淬滅基團選擇“None”,染料校正選擇“None”。另外,這 3 個熒光通道分別對應副溶血性弧菌特異性基因、TRH 和 TDH 基因的檢測。

3, 結果:一般情況下,可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結果。如需調整,可根據(jù)所使用儀器的自身情況(如噪聲等)以及選取的不同熒光通道進行調整。

   1) 質量控制:陰性對照未出現(xiàn)明顯的 S 型擴增曲線或Ct 值>35,陽性對照出現(xiàn) S 型擴增曲線且其 Ct 值<30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件,則本次檢測結果無效,應重新檢測或與產品技術支持聯(lián)系。

   2) 結果判讀:(根據(jù)反應所得 Ct 值判讀,具體見下表:)

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)結果判讀

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