平板集落形成實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)介紹
發(fā)布時(shí)間：2023-08-23 瀏覽次數(shù)：1312
細(xì)胞集落形成是檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞增殖能力的有效方法，通過計(jì)算集落形成率，來測(cè)定測(cè)試細(xì)胞的增殖能力。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：6孔板、吸管、槍頭、血球計(jì)數(shù)板、基質(zhì)膠等放入超凈工作臺(tái)消毒30min。
1、平板集落形成實(shí)驗(yàn)(適用于貼壁細(xì)胞)
① 取出貼壁率 > 90%的細(xì)胞(處于對(duì)數(shù)生長期)，消化離心，重懸細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
② 6孔板種板：實(shí)驗(yàn)分組，每個(gè)孔中加入1000個(gè)細(xì)胞，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
③ 培養(yǎng)1周后，當(dāng)肉眼可見集落形成時(shí)，取出6孔板，棄除培養(yǎng)液，每孔加入2mL甲醇固定30min，棄除甲醇，每孔加入2mL 0.1%結(jié)晶紫染色3min，然后清洗掉結(jié)晶紫，數(shù)碼相機(jī)拍照，光鏡下計(jì)數(shù)集落
結(jié)果如下：
2、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)(適用于懸浮細(xì)胞)
1. 收集對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后調(diào)整細(xì)胞濃度，用含20%FBS的DMEM制成1000活細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。
2. 用蒸餾水制備1.2%、0.7%兩個(gè)濃度的低熔點(diǎn)瓊脂糖，高壓滅菌后，維持在40℃不會(huì)凝固；
3. 1.2%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作為底層瓊脂，置CO2溫箱中備用；
4. 0.7%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，再加入細(xì)胞懸液充分混勻，RT凝固作為上層瓊脂，勿有氣泡，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標(biāo)記。在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固。
5. 然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進(jìn)行培養(yǎng)。
6. 培養(yǎng)7～10天，肉眼觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。
結(jié)果：
以肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn)。集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算：集落數(shù)=n孔中細(xì)胞集落數(shù)總和/n孔，
集落形成率 = 集落數(shù)/接種培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100%
結(jié)果如下:
來源：“YuJinBio譽(yù)津醫(yī)學(xué)”公眾號(hào)，作者~Lisa。
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